熟地黃及其多糖**抑製作用研究
摘要:目的:研究熟地黃及其多糖的**抑製作用。方法:通過小鼠自發活動實驗、抗驚厥實驗、**催眠實驗觀察熟地黃及其多糖對**的抑製作用。結果:熟地黃煎液、熟地黃多糖均能夠抑製小鼠的自發活動;縮短閾下劑量****鈉誘導的小鼠睡眠潛伏期,延長睡眠時間;延緩異煙肼驚厥的發作潛伏期,減少動物死亡數。結論:熟地黃煎液、熟地黃多糖對**神經係統具有抑製作用。
在以往的研究中發現,地黃有一定的**抑製作用,但關於熟地黃的**抑製作用尚未見研究報道。鑒此,我們進行了熟地黃及其多糖的**抑製作用研究。
1 實驗材料
1.1 實驗藥品
熟地黃煎液:熟地黃為玄參科植物地黃Rehmanniagluti2nosa Libosch乾燥根的加工品。生地黃購自原產地武陟,經中藥鑒定教研室陳隨清教授鑒定確認。參照《中國藥典》(2000年版,一部)酒燉法炮製成熟地黃。熟地黃加水煎煮,**次加入6倍量水,煮沸1 h ,**、三次均加入4倍量水,煮沸1 h ,合並濾液,濃縮至1∶1(1g/ ml) ,冰箱冷藏(4℃)備用,用時按需要稀釋。熟地黃多糖:熟地黃乾燥品,以95 %乙醇8倍量、6倍量、6倍量依次回流提取4 h、3 h、3 h ,藥渣置通風處晾乾;藥渣分彆加水10倍量、8倍量、8倍量,於90℃～100℃水浴依次溫提4 h、3 h、3 h ,過濾,合並濾液,離心15 min ,得上清液,濃縮至1∶1(1g/ ml) ,用95 %乙醇調含醇量至80 % ,靜置過夜,抽濾得沉澱。取粗多糖加水溶解,加入等體積30 %三***溶液,靜置離心,上清液用0. 01 mol/ L的氫氧化鈉調p H =7 ,減壓濃縮,濃縮液流水透析,將透析液減壓濃縮至適當體積,加入95 %乙醇調含醇量至80 % ,放置,抽濾,沉澱用無水乙醇、丙酮、無水乙醚依次洗滌,真空乾燥,得粗多糖。用時按需加蒸餾水配成溶液。***:購自河南中醫學院第三附屬醫院,天津製藥廠生產,批號: 0305004 ,規格: 5 mg/片。用時研成粉末,用0. 5 %CMC - Na配成藥液。
1.2 實驗動物
昆明種小鼠,豫醫動字410115 ,普通級,體重為(20±2) g,雌雄兼用,購自河南省醫學實驗動物中心。1.3 主要儀器和試劑小鼠自主活動測試儀:成都泰盟科技有限公司生產;****鈉: Serva 公司,上海化學試劑站分裝;異煙肼:上海信誼藥業有限公司生產,批號:040301 ,規格:100 mg/片。
2 實驗方法
2.1 分組與給藥
動物購入後適應性飼養2d ,隨機分為4組:對照組,***組,熟地黃多糖組,熟地黃煎液組。各組給藥情況如下:對照組灌胃生理鹽水;***組前4 d灌胃生理鹽水,後3 d灌胃***藥2. 5 mg·kg- 1·d- 1;熟地黃多糖組前4 d灌胃生理鹽水,後3 d灌胃熟地黃多糖0. 5g·kg- 1·d
- 1;熟地黃組灌胃熟地黃水煎液8g·kg- 1·d- 1給藥7 d。給藥期間小鼠自由進食飲水。
2.2 自發活動實驗
實驗於末次給藥60min後進行。用小鼠自發活動儀測定記錄各組小鼠10 min內活動次數。
2.3 閾下劑量****鈉致小鼠睡眠實驗末次給藥60 min後,各組小鼠分彆腹腔注射****鈉(40 mg·kg- 1) 。以給藥到翻正反射消失的時間為入睡時間,即睡眠潛伏期(min) ;從翻正反射消失到恢複蘇醒的時間為睡眠持續時間(min) 。觀察記錄實驗期內小鼠的睡眠潛伏期和睡眠持續時間,觀察時間以60 min為限,超過者均以60 min計算。
2.4 異煙肼致小鼠驚厥實驗
末次給藥60 min後,各組小鼠分彆腹腔注射異煙肼(300 mg·kg- 1) 。觀察記錄小鼠60 min內出現陣攣性和強直性癲癇的時間作為發作潛伏期(min) ,觀察每組動物死亡數。
3 實驗結果
3.1 熟地黃及其多糖對小鼠自發活動的影響與對照組比較,***、熟地黃多糖可顯著地減少小鼠自主活動次數, P< 0. 01 ,P< 0. 05 ;熟地黃煎液有減少小鼠自主活動次數的趨勢。熟地黃多糖、熟地黃煎液與***三組間比較無顯著性差異( P> 0. 05) ,
3.2 對閾下劑量****鈉致小鼠睡眠的影響與對照組比較,***顯著地縮短小鼠睡眠潛伏期( P< 0. 05) ,延長睡眠時間( P< 0. 01) ;熟地黃多糖可顯著地縮短小鼠睡眠潛伏期( P< 0. 05) ,延長睡眠時間( P< 0. 05) ;熟地黃可顯著地縮短小鼠睡眠潛伏期( P< 0. 05) 。熟地黃多糖
組、熟地黃煎液組與***組三者組間比較無顯著性差異( P>0. 05) 。3.3 對異煙肼致小鼠驚厥的影響與對照組比較,***可顯著地延緩異煙肼驚厥發作潛伏期( P< 0. 05) ;熟地黃多糖有延緩異煙肼驚厥發作潛伏期作用;熟地黃煎液可顯著地延緩異煙肼驚厥發作潛伏期( P<0. 05) ;熟地黃多糖組、熟地黃煎液組與***組三者組間比較無顯著性差異( P> 0. 05) 。三者均能使60 min內動物死亡數減少。
4 小結
實驗結果表明,熟地黃煎液、熟地黃多糖均能夠抑製小鼠的自發活動;縮短閾下劑量****鈉誘導的小鼠睡眠潛伏期,延長睡眠時間;延緩異煙肼驚厥的發作潛伏期,減少動物死亡數。因而,熟地黃煎液、熟地黃多糖對**神經係統具有抑製作用,其作用機製有待進一步研究。
