超早期電針乾預對腦缺血再灌注模型大鼠智能作用的研究

摘 　要:目的:觀察缺血前期電針對大腦中動脈缺血再灌注模型大鼠智能的影響,並探討其作用機理。方法:選用實驗用SD大鼠45隻,分為假缺血組、模型組、缺血前期電針組,通過避暗試驗觀測其行為,並於術後12h處死大鼠,檢測其患側海馬膽堿酯酶活力。結果:和模型組相比,缺血前期電針組避暗實驗潛伏期延長,錯誤次數均減少,並且提高海馬膽堿酯酶活力。結論:缺血前期電針能改善局部的血液循環,促使神經功能的恢複,具有防治缺血性中風及保護腦缺血再灌注損傷的作用。提示臨床早期電針防治中風智能障礙具有積極意義。

關鍵詞:電針;足三裡;百會;環跳;腦缺血再灌注;智能;膽堿酯酶;避暗實驗;大鼠

　　腦血管**是危害人類生命和健康的常見病和多發病,其中缺血性中風(AIS) 占有相當大的比例(75 %～85 %) 。西醫**中風在基礎研究方麵取得了較大的進展, 但臨床治

療進展不大, 目前尚缺乏特效的****和方法。針灸療法已從對中風後遺症期和恢複期的**進入到了對急性期的**, 但是在超早期**方麵的係統研究還有待完善。本實驗

通過觀察缺血前期(缺血後即刻) 電針對大腦中動脈缺血再灌注模型大鼠智能的影響, 並探討其作用機理, 從而探索一種**、有效、方便, 可用於中風早期改善智能的方法。

1　動物分組及模型製備

選用實驗用SD大鼠45隻, 清潔級, 雄性, 體重300±50g。上海中醫藥大學實驗動物中心提供。采用完全隨機法分為3組, 即假缺血組、模型組、缺血前期電針組, 每組各15隻。參照Zea - longa的方法製備大鼠大腦中動脈缺血再灌注模型(MCAO) 。缺血115h後拔出栓線, 使缺血區血流再灌。假缺血組進行手術至插栓線前。

2　**方法

①假缺血組、模型組: 同樣抓取, 不進行**。②缺血前期電針組: 栓線插入開始**。選百會、曲池、環跳、足三裡(患側) , 用G6805電針儀, 采用疏密波, 頻率為4～20Hz , 在示波器監視控製下的電流強度為3mA , **30min。

3　測試指標

311　避暗試驗(step - throughtest) 　測試大鼠被動回避反應。大鼠避暗反應儀分為明、暗兩室。明室上方以鎢燈照明, 暗室的底部銅柵通以38V交流電, 兩室之間設有一直徑4cm的

圓孔。術前12h將各組大鼠分彆放入明室, 利用大鼠嗜暗的特性讓其鑽入暗室, 然後關閉小門, 進行通電、電擊30s後放出。反複進行2次使其獲得記憶。在術後斷頭之前進行測

試, 記錄大鼠10min內進入暗室的次數作為錯誤次數, **次進入的時間為潛伏期。312　缺血側海馬膽堿酯酶(CHE) 　術後12h , 大鼠斷頭後迅速取缺血側海馬(012～1g) , 然後如下步驟操作。①在冰冷生理鹽水中漂洗, 除去血液, 濾紙拭乾, 稱重, 用移液管取冷生理鹽水(重量是組織塊的9倍) , 放於10ml試管中,用眼科小剪儘快剪碎組織塊。②勻漿: 用高速勻漿機1000轉Pmin上下研磨製成10 %組織勻漿液。 ③離心: 將製備好的10 %勻漿液用離心機3000轉Pmin離心15min , 取上清液置於10ml試管中, 凍在- 20℃待檢。④待收集完樣品, 統一采用721可見分光光度計測定, 用考馬斯亮藍測定蛋白含量。

4　實驗結果

411　各組大鼠海馬膽堿酯酶的變化 　。假缺血組和缺血前期電針組相比, 無顯著差異( P> 0105) (注: 膽堿酯酶活力不符合正態分布, 故采用了對數轉換進行了校正) 。

412　各組大鼠避暗試驗(step - throughtest) 結果 　缺血前期電針組與假缺血組相比, 有升高趨勢, 但冇有顯著

差彆( P> 0105) 。

5　討論

通過避暗實驗我們發現, 缺血前期電針可改善模型大鼠學習記憶能力, 從行為學的角度提供了其臨床**缺血性中風的實驗依據。海馬為大腦邊緣係統的重要組成部分, 在學習、記憶等**神經活動中起重要作用。海馬的正常結構和機能與學習記憶機能密切相關。雙側海馬或優勢半球海馬病變時, 可出現明顯的學習記憶障礙。實驗表明, 損毀雙側海馬嚴重影響大鼠空間作業的認知能力, 並可導致迷宮學習的嚴重障礙。海馬是對腦缺血*敏感的部位之一。**膽堿能神經及神經纖維廣泛分布於運動和感覺係統、腦乾網狀結構、邊緣係統及大腦皮層, 有促進學習記憶、激活腦電、維持覺醒、參與精神意識活動等重要生理功能。隨著神經化學、神經遞質生物學和分子生物學的發展,人們逐漸發現神經遞質的異常在缺血性腦損傷中起重要作用。乙酰膽堿(Acetylchdine , ACh) 是發現*早的經典神經遞質, 但它在腦缺血時的變化研究甚少。Phillis

應用皮層

透析杯技術和HPLC測定腦缺血後ACh釋放量, 發現腦缺血後ACh釋放量很快上升。有研究也發現腦缺血後大腦皮層ACh含量下降, ACh 釋放量上升。乙酰膽堿酯酶(AChE) 是ACh的降解酶, 它的活性改變直接說明ACh的降解情況。AChE的存在並不能完全代表膽堿能神經分布, 但目前報道公認AChE活性部位是ACh的陽性部位, 廣泛用於判斷膽堿能神經的活性。本實驗研究發現電針乾預組AChE活性均趨於假缺血組, 而模型組下降, 因此ACh的降解減弱, ACh 在突觸間隙堆積增加, 其突觸後效應必然放大, 推測可能與缺血性腦損傷有關。而電針乾預組卻與假缺血組持平, 體現了電針的作用。缺血前期電針乾預作為超早期防治, 是有效的, 可以降低缺血再灌注損傷, 改善其智能, 這對於臨床是有著重要意

義的。但還有待於進一步臨床觀察驗證。特彆是在臨床上要注意根據病人的體質等因素, 綜合判斷理想**方案。