BDNF、 NGF 对AD 模型鼠脑移植区胚胆碱能

　【摘要】　目的　探讨脑源性神经营养因子(BDN F)、神经生长因子(N GF)对AD 模型鼠脑植入胚基底前脑后
行为改善和移植区胚胆碱能神经元发育生长的影响。　方法　用使君子酸损毁SD 大鼠基底大细胞核制成AD 模
型, 分成BDN F、 N GF、 BDN F+ N GF 及单纯移植对照 4 组。在额、顶叶皮质植入同种胚基底前脑细胞悬液, 前 3 组
含相应神经营养因子, 移植后每2d 向侧脑室灌注相应神经营养因子共 7 次。移植后1、 215 和4 个月时行避暗回避
试验和跳台试验, *后脑切片经AChE 组织化学、 ChA T 和LN GFR **组织化学等染色, 对移植区中的神经元及
纤维作定量分析和图像处理。 　结果　移植后应用神经营养因子的动物较对照组行为改善明显迅速,BDN F+ N GF
组行为改善又较BDN F 组或N GF 组明显。形态学证实, 应用神经营养因子动物移植区中AChE 阳性神经元数、
16 900L m2
网格中AChE 阳性纤维交点数及AChE 阳性神经元面积均优于对照组,BDN F+ N GF 组的结果又好于
BDN F 组或N GF 组。　结论　BDN F 与N GF 一样能促进植入胚基底前脑的AD 模型鼠行为改善和移植区胚胆碱
能神经元的发育生长,BDN F 和N GF 联合使用比单独使用一种因子更为有效。
【关键词】　脑源性神经营养因子(BDN F)　神经生长因子(N GF)　胚胆碱能神经元　脑内移植　AD 模型鼠
3 国家自然科学基金资助课题(No. 39170278)
△Department of N eurobio logy,N antongM edical Co llege,N antong　226001, Ch ina
MODULATION OF BDNF AND NGF ON THE DEVELOPM ENT
OF EM BRYONIC CHOL INERGIC NEURONS IN
BRA IN GRAFTS OF AD MODEL RATS
J in Guohua, Xu Huijun , W u Yim ing, Zhong Sh izheng
(D ep artm ent of N eu robiology ,N antong M ed ical Col leg e,N antong;
3
D ep artm ent of A natomy , T he F irstM il itary M ed ical U niversity , Guang z hou)
【Abstract】　Object ive　The effects of BDN F and N GF on the behavioural imp rovement and the development
of embryonic cho linergic neurons of graf ts in AD model ratsw ere studied . Methods　AD model ratsw ere obtained
by inject ions of quisqualic acid into the nucleus basalismagnocellular is . The f rontal and par ietal co r tex ofAD model
rats received the t ransp lantat ion of the same species fetal basal fo rbrain suspensions w ith BDN F,N GF, BDN F +
N GF and w ithout neuro t roph ic facto rs . Mo reover the neuro thoph ic facto rsw ere injected into the cerebral vent r icle
every two days fo r seven t imes . Step2th rough passive avo idance and act ive avo idance testsw ere car r ied at 1, 215 and
4 month s af ter graf t ing . B rain sect ionsw ere stained w ith AChE h istochem ist ry and ChA T o r LN GFR immunoh is2
tochem ist ry . The number of neurons and f ibers in the graf ts w as analysed quant itat ively w ith computer image sys-
tem. Results　The behaviour of animals infused w ith neuro t roph ic facto rs imp roved mo re obviously and quick ly
than the animals infused w ith no neuro t roph ic facto rs . The behavioural imp rovement of BDN F+ N GF group w as
super io r to that of BDN F o r N GF group. Themo rpho logy demo st rated that the number of AChE po sit ive neurons,
3 国家自然科学基金资助课题(No. 39170278)
△Department of N eurobio logy,N antongM edical Co llege,N antong　226001, Ch ina
f ibers’ cro ssing po ints of 16 900L m2
gr id and cell size in graf ts of animals infusedw ith neuro thoph ic facto rsw ere al2
so super io r to that of the animals w ithout neuro t roph ic facto rs, and the data of BDN F + N GF group w ere bet ter
than that of BDN F o r N GF group. Conclus ion　BDN F, as same asN GF, could p romo te the behaviour funct ion and
the development of embryonic cho linergic neurons of graf ts in AD model rats and the combined use of BDN F and
N GF w asmo re effect ive than one k ind mo lecule alone .
【Key words】　BDN F; N GF; Embryonic cho linergic neurons; B rain t ransp lantat ion; AD model rat
　　老年性痴呆(A lzheim er disease,AD )的病理变
化除在大脑皮质出现以B 2淀粉样蛋白沉淀为主的老
年斑和神经原纤维缠结外, 基底前脑胆碱能神经元
丧失、皮质胆碱能神经纤维支配减少是主要的病理
改变。人们曾尝试用多种方法**AD, 但效果均不
理想。有报道用富含胆碱能神经元的胚基底前脑移
植到宿主新皮质或海马能明显改善AD 模型鼠的学
习和记忆能力[ 1～ 3 ]
。近年来研究表明, 神经生长因子
nerve grow th facto r,N GF)、脑源性神经营养因子
b rain2 der ived neu ro t roph ic facto r, BDN F ) 对体外
培养的胚胆碱能神经元具有明显促进成活和分化作
含1 块胚基底前脑原基的细胞悬液, 按分组要求, 在
悬液中分别加入重组人BDN F (美国Sain t Lou is 大
学徐晓明博士惠赠)和N GF (7s, 宝灵曼公司) , 浓度
为0125gö L , 对照组不加神经营养因子。
AD 模型鼠麻醉固定于立体定位仪, 取左侧额、
顶叶皮质为移植点。额叶坐标为A = 117mm , L =
310mm ,V = 212mm (脑膜下) ; 顶叶坐标为A = -
113mm , L = 416mm ,V = 218mm (脑膜下)。每点在
10m in 内用微量进样器注入 715Ll 细胞悬液, 留针
10m in, 缓慢退针。移植完毕, 将长5mm 带芯套管插
入同侧侧脑室, 用聚甲基丙烯酸甲酯将其快速固定
用 , 经侧脑室或脑实质应用N GF、 BDN F 亦能保
护基底前脑胆碱能神经元免受隔海马离断而致的退
变, 并减轻痴呆程度[ 6, 7 ]
。本实验将BDN F、 N GF 加
入富含胆碱能神经元的胚基底前脑细胞悬液中, 植
入AD 模型鼠新皮质, 并通过脑室灌注神经营养因
子, 观察BDN F、 N GF 以及它们联合使用对AD 模
型鼠脑移植区胚胆碱能神经元发育生长的调控, 为
将神经营养因子与脑移植相结合应用于临床**
AD 等神经系统退行性**提供实验和理论依据。
材料和方法
11 AD 模型鼠的制备
220～ 250g SD 大鼠, 性别不拘, 用复合麻醉剂
Ch lo rpen t 经腹腔麻醉(2m lö kg) , 固定于立体定位
仪,参照 Pax ino s 图谱, 根据基底大细胞核(NBM )
于颅骨, 按分组将用人工脑脊液配制的相应神经营
养因子 4Ll (5gö L )注入侧脑室, 1 次ö 2d, 共7 次。于
*后1 次灌注的次日拔管。对照组灌注同量人工脑
脊液。
31 行为测试
测试仪器和方法同施碧涛报道[ 9 ]
。
　311　避暗回避试验: 在注射QA 后1 周及移植后
1、 215 及 4 个月时进行, 移植后进行时增设正常对
照组(6 只动物) , 记录试验第3d 的探索次数和第6d
的滞留时间。
　312　跳台试验: 在移植后1、 215 及4 个月避暗回
避试验结束后进行, 记录第 7d 的主动及总回避(主
动+ 被动)反应阳性率。
41 形态学检测
行为测试完毕, 动物麻醉后经升主动脉灌注
的位置, 取左侧头尾 2 个注射点, 每点注射
0114mo lö L 的使君子酸(QA , Sigm a 公司) 015Ll, 速
度 011Llö m in, 留针 5m in。1 周后进行避暗回避试
验, 若滞留时间小于 300s (正常鼠大于 900s)则为记
忆能力低下, 随机抽取其中 10%的动物经AChE 组
织化学和ChA T **组织化学染色证实NBM 被损
毁, 则该批鼠确定为AD 模型成功鼠。
21 胚脑移植和神经营养因子的应用
取 24 只AD 模型鼠随机分成BDN F、 N GF、
BDN F + N GF 和单纯移植对照(对照组) 4 组, 每组
6 只。
取 E15～ 17 (头臀长 12～ 16mm )的同种大鼠胚
基底前脑原基, 根据B jo rk lund
[ 8 ]
的方法制成每 10Ll
100m l 生理盐水和 400m l 4%多聚甲醛 011mo lö L
PBS (pH714) , 在立体定位仪上取前囟前后 4mm 一
段脑, 后固定 4h, 入 4℃、 20%庶糖 011mo lö L PBS
(pH714)中, 次日行冰冻连续切片, 厚 40L m, 共收集
4 套。第1 套尼氏染色; 第2 套乙酰胆碱酯酶(acetyl2
cho linesterase,AChE)组织化学染色; 从第3、 4 套中
挑选部分有移植区的切片作胆碱乙酰转移酶(cho line
acetylt ran sferase, ChA T )和低亲和力神经生长因子
受体 ( low aff in ity nerve grow th facto r recep to r,
LN GFR)**组织化学染色, 一抗为购自宝灵曼公司
的小鼠ChA T 和LN GFR 单克隆抗体, 工作浓度分
别为10m gö L 和5m gö L , 二抗为V ecto r 公司生物素
化的兔抗小鼠 IgG, 1∶200 稀释, 用ABC 法、 DAB
硫酸镍铵加强法呈色。 AChE 组织化学染色切片进行
(1) 计数移植区AChE 阳性神经元数; ( 2) 参照
L ew is
[ 10 ]
方法, 在×600 显微镜下, 有移植区的切片
随机抽取 3 个视野, 计数移植区中AChE 阳性纤维
在 16 900L m2
网格中与纵横线的平均交点数; (3)每
张有移植区的切片随机抽取 4 只AChE 阳性神经
元, 每只动物共40 个细胞, 用M IA S2300 计算机图像
处理系统进行细胞面积分析。
51 统计分析
探索次数、滞留时间和AChE 阳性神经元的细
胞数、纤维交点数及面积进行方差分析和 SN K 检
验, 各组数据先行方差齐性检验, 若方差不齐, 平方
根变换后再行检验。主动及总回避反应阳性率进行
V
2
检验。
结　　果
　111　避暗回避试验: 移植前 4 组模型鼠避暗回避
试验的探索次数和滞留时间方差分析P 均> 0105,
说明4 组模型动物行为无显著性差异。移植后1 个
月, 各实验组的探索次数和滞留时间与正常对照组
相比有较大差距; 在4 组实验动物中, 应用神经营养
因子的 3 组动物与单纯移植对照组相比, 探索次数
明显减少, 滞留时间明显延长。至215 和4 个月时,
各实验组的探索次数和滞留时间逐渐接近正常对照
组, 但以BDN F + N GF 组较为明显, 单纯移植对照
组与正常对照组仍有差距; 4 个实验组的探索次数
进一步减少, 但单纯移植对照组在 4 个月时才接近
使用神经营养因子的动物; 滞留时间在应用神经营
养因子的动物进一步延长, 单纯移植对照组虽有延
长, 但至 4 个月时与其他组相比仍有差距。移植后
1、 215 和 4 个月时 4 组实验动物和正常对照组动物
避暗回避试验和方差分析结果分别见表1, 2。
11 行为测试结果
表 1　移植后1、 215 和 4 个月时 4 组实验动物和正常对照组动物避暗回避试验结果(x q)
Table 1　The results of step2th rough passive avo idance test ing in four exper imental group and
no rmal group animals 1 month, 215 and 4 month s af ter graf t ing (x q)
BDN F 组
BDN F group
1 个月 2 . 5 个月 4 个月
N GF 组
N GF group
1 个月 2 . 5 个月 4 个月
BDN G+ N GF 组
BDN G+ N GF group
1 个月 2 . 5 个月 4 个月
对照组
cont ro l group
1 个月 2 . 5 个月 4 个月
正常对照组
no rmal group
1 个月 2 . 5 个月 4 个月
探索次数
acquisit ion f requency
212 118 113 210 115 115 118 113 113 317 218 118 110 018 017
滞留时间(秒)
retent ion t ime ( s)
330 530 800 333 517 760 445 892 1040 146 330 543 930 1020 1137
表 2　移植后1、 215 和 4 个月时 4 组实验动物和
正常对照组动物避暗回避试验方差分析结果
Table 2　The results of ANOV fo r step 2th rough passive
avo idance test ing in four exper imental group and no rmal
group animals one month, 215 and 4 month s af ter graf t ing
探索次数
acquisit ion f requency
滞留时间
retent ion t ime
实验组与正常对照组间的差异仍具显著性(P <
0105 或 0101)。而在各实验组中, 移植后 215 个月
时, 探索次数和滞留时间除应用神经营养因子的各
组与单纯移植对照组间存在显著性差异(P < 0105
或 0101)外, 应用神经营养因子的各组滞留时间比
较,BDN F+ N GF 组与BDN F 组或N GF 组间均具
F4125 P F4125 P
1 个月(month s) 10162 < 0101 15182 < 0101
215 个 月
(month s)
7105 < 0101 16189 < 0101
4 个月(month s) 4149 < 0101 8171 < 0101
　　SN K 检验结果表明, 移植后 1 个月的探索次数
和滞留时间, 各实验组与正常对照组之间的差异均
有显著性(P < 0105 或 0101) ; 在实验组中, 应用神
经营养因子的各组间无显著性差异, 而它们与对照
组之间均有显著性差异(P < 0105 或 0101) ; 移植后
215 个月和 4 个月时, 4 个实验组的探索次数与正常
对 照组比较, 其差异均有显著性 (P < 0105 或
0101) ; 滞留时间除BDN F + N GF 组外的其余 3 个
有显著性差异(P < 0101) ; 移植后 4 个月时, 仅BD2
N F+ N GF 组与单纯移植对照组间的滞留时间仍存
在显著性差异(P < 0101)。
　112　跳台试验: 移植后 1 个月, 应用神经营养因
子的 3 组动物主动和总回避反应阳性率均明显提
高, 而对照组主动回避反应阳性率几乎为 0, 总回避
反应阳性率也较低。至215 和4 个月时, 应用神经营
养因子的3 组动物主动和总回避反应阳性率均呈较
大幅度增加, 对照组虽有增加, 但幅度较小, 跳台试
验第 7d, 主动和总回避反应阳性率结果见表 3。V
2
检验结果表明, 移植后 3 个时期, 主动回避反应阳性
率应用神经营养因子的3 组动物间差异均无显著性
(P > 0105) , 而它们和单纯移植对照组间的差异均
有显著性(P < 0105 或 0101) ; 总回避反应阳性率在
应用神经营养因子的 3 组动物间除移植后 1 个月
BDN F + N GF 组与BDN F 组之间差异有显著性(P
< 0105) 外, 其余各个时期均无显著性差异(P >
0105) , 而它们和单纯移植对照组间的差异各个时期
均有显著性(P 均< 0101)。
表 3　4 组实验动物移植后1、 215 和 4 个月时跳台试验第7d 主动和总回避反应阳性率(% )
Table 3　The po sit ive rate of act ive and to tal avo idance react ion in four exper imental group
animals one month, 215 and 4 month s af ter graf t ing (% )
BDN F 组
BDN F group
N GF 组
N GF group
BDN F+ N GF 组
BDN F+ N GF group
对照组
cont ro l group
主动回避
act ive avo idance
2313 3813 4313 2510 3617 4510 3313 4617 5813 011 1313 2313
总回避
to tal avo idance
5813 8510 9313 7313 8313 9117 8813 8813 9313 3010 5617 7117
21 形态学结果
　211　正常NBM 及NBM 损毁后的形态学结果:
尼氏片见正常NBM 区以中到大细胞为主, 组织化
学和**组织化学见AChE 和ChA T 阳性细胞呈
梭形或三角形(图1A )。 QA 损毁后,AChE 或ChA T
阳性神经元基本消失(图 1B )。正常额、顶叶皮质
AChE 阳性纤维密度较高(图2A ) ,NBM 损毁后, 皮
质的AChE 阳性纤维终末大部分消失(图2B)。
　212　移植区形态学结果: 尼氏片见4 组动物移植
区细胞均能存活, 移植区镶嵌在皮质中。移植区细胞
向宿主迁移的趋势, 胶质细胞减少, 部分边界消失
(图3)。
AChE 组织化学染色片中, 各组移植区AChE
阳性神经元散在或成群分布, 以移植区和宿主交界
处多见; 深染的纤维成网状或斑片状, 部分AChE
阳性纤维伸入到宿主皮质, 以应用神经营养因子的
动物较多见。应用神经营养因子的各组和单纯移植
对照组比较, AChE 阳性神经元较多, 纤维密度较
高, 面积较大, 应用神经营养因子的各组中又以BD2
N F + N GF 组的结果较好(图 4～ 6)。4 组实验动物
成群分布, 以中等大小细胞多见。和单纯移植对照组
相比, 可看出应用神经营养因子动物移植区细胞有
移植区AChE 阳性神经元有关统计指标结果见表
4。
表 4　4 组实验动物移植区AChE 阳性神经元有关指标统计结果(x q±s)
Table 4　The stat ist ical results of AChE po sit ive neurons in graf t areas of four exper imental group animals (x q±s)
BDN F 组
BDN F group
N GF 组
N GF group
BDN F+ N GF 组
BDN F+ N GF group
对照组
cont ro l group
方差分析ANOV
F3120 P
AChE 神经元数
number of AChE neurons
205±31 252±27 295±42 158±28 17120 < 0101
AChE 神经元面积(L m2)
size of AChE neurons (L m2)
1 762±168 1 960±129 2 181±279 1 410±167 16103 < 0101
AChE 纤维交点数
number of AChE f ibers’ cro ssing po ints
60±9 61±8 76±13 44±7 11179 < 0101
　　SN K 检验结果显示,AChE 阳性神经元数各组
间比较, 其差异均有显著性(P < 0105 或 0101) ,
AChE 阳性神经元面积和AChE 阳性纤维交点数各
组间比较, 除BDN F 组与N GF 组之间无显著性差
异外, 其余各组间均有显著性差异(P < 0105 或
0101)。
**组织化学染色片, 见移植区中 ChA T 或
LN GFR 阳性神经元大多亦分布在移植物和宿主交
动物移植区中**反应阳性神经元生长相对较好
(图7, 8)。
讨　　论
本实验表明, 应用神经营养因子和单纯脑移植
的动物移植后行为均得到改善, 但应用神经营养因
子各组移植后早期即见行为明显改善, 而对照组到
4 个月时其改善程度仍不及应用神经营养因子的各
界处, LN GFR 和ChA T 阳性神经元数量两者相比
较,以LN GFR 阳性神经元略多。应用神经营养因子
组, 这与 Sin son
[ 11 ]
在皮质损伤的模型中植入胚 16d
皮质, 用微泵直接灌注N GF 至移植区, 14d 后就发
现记忆缺损和运动功能明显改善的结果类似。形态
学也证实, 应用神经营养因子动物的移植区中
AChE 阳性神经元数目明显增多, 胞体面积和纤维
密度也明显增大, 这与Mou ton
[ 12 ]
将N GF 直接灌注
于AD 模型鼠皮质移植区导致移植物体积明显增
大、胆碱能神经元增多、纤维密度增加的结果相同。
这些结果的取得可能是由于胚脑细胞悬液中加入神
经营养因子, 能保护因取胚脑、制备悬液时受到损伤
的神经元免于死亡, 并且提供有利于移植物存活的
微环境, 从而提高了胚脑细胞的存活率。加之本研究
在移植后早期, 通过脑室灌注神经营养因子, 使移植
入宿主的胚脑神经元可继续得到神经营养因子的营
养作用, 亦可保护宿主神经元免受移植而导致的损
害, 表现为胶质反应减轻, 有利于移植物与宿主的整
合。BDN F+ N GF 组行为和形态学结果均较单独使
用BDN F 或N GF 为好, 这和我们[ 5 ]
在体外培养中
证实BDN F 与N GF 联合使用对胚胆碱能神经元能
胼胝体　×10
图2　A 1正常侧大脑皮质AChE 阳性纤维; B1QA 损毁侧大脑皮质
AChE 阳性纤维减少　×10
图3　尼氏染色, ↑处示BDN F 组移植区(G)与宿主皮质(H)间界限
已不明显　×10
图4　N GF 组移植区中AChE 阳性神经元胞体较大　×100
图 5　BDN F+ N GF 组移植区中AChE 阳性神经元胞体较大, 突起
丰富　×100
图6　对照组移植区中AChE 阳性神经元胞体较小、突起较少、较短
　×100
图 7　LN GFR **组织化学染色, 示BDN F+ N GF 组移植区中的
LN GFR 阳性神经元　×50
图8　ChA T **组织化学染色, 示N GF 组移植区与宿主交界处的
ChA T 阳性神经元(↑)　×50
Exp lanat ion of f igures
F ig . 1　A: No rmal side ChA T po sit ive neurons in nucleus basalis
magnocellularis; B: ChA T po sit ive neurons disappeared in
QA lesioned side nucleus basalismagnocellularis . A rrow in2
dicated the dest royed areas, C: co rpus callo sum　×10
F ig . 2　A: AChE po sit ive f ibers in no rmal side cerebral co rtex; B:
发挥协同作用的结果相一致, 表明BDN F 和N GF
的协同作用不仅在体外有效, 在体内也产生同样的
效应。
Mou ton
[ 12 ]
的在体研究表明,N GF 具有明显促
进移植的胚胆碱能神经元发育生长的作用, 而BD2
N F 对移植的胚胆碱能神经元的作用尚未见报道。
本实验证实,BDN F 和N GF 一样, 对移植的胚基底
前脑胆碱能神经元具有明显提高细胞存活率, 促进
胞体和突起发育生长的作用。
本实验的移植物是富含胆碱能神经元的胚基底
前脑, 但在移植物中, 作为胆碱能神经元特异性标志
物的ChA T 阳性神经元却较少。R idley
[ 13 ]
也观察到
类似结果。究其原因, 可能与体内复杂的微环境影响
了ChA T 的表达有关。而应用神经营养因子的动物
co rtex　×10
F ig . 3　N issl staining, show ing the boundary (↑) between the graf t
(G) and ho st co rtex (H) was no t obvious　×10
F ig . 4　AChE po sit ive neuronsw ith larger cell body in the graf t area
of N GF group　×100
F ig . 5　AChE po sit ive neurons w ith larger cell body and richer p ro2
cesses in the graf t area of BDN F+ N GF group 　×100
F ig . 6　AChE po sit ive neurons w ith smaller cell body, fewer and
sho rter p rocesses in the graf t area of cont ro l group 　×100
F ig . 7　LN GFR immunoh istochem ical staining, show ing LN GFR
po sit ive neurons dist ributed in the graf t area of BDN F +
N GF group　×50
F ig . 8　ChA T immunoh istochem ical staining, ChA T po sit ive neu2
rons (↑) situated in the bo rder between the graf t area and
ho st co rtex　×50
ChA T **组织化学染色结果好于对照组, 可能与
神经营养因子对胆碱能神经元的营养作用及促进
ChA T 的表达不无关系。虽然基底前脑大部分胆碱
能神经元 ChA T 与LN GFR 共存[ 14 ]
, 但新近的研
究[ 15 ]
提示,N GF 和BDN F 对胚胆碱能神经元的营
养作用可能是分别通过它们的高亲和力受体 t rkA
和 t rkB 介导而实现的。
收稿1998203　　修回1998209
本文图1～8 见插图第3 页
图 版 说 明
图1　A 1正常侧基底大细胞核的ChA T 阳性神经元; B1QA 损毁侧
基底大细胞核未见ChA T 阳性神经元　↑示QA 注射区; C1
参 考 文 献
[ 1 ]张之福, 徐慧君, 武义鸣, 等. 胚基底前脑原位移植与靶区移植对
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·研究通讯·
脑胶质瘤基因**3
田竟生　刘天承　李爱华　孙阳　刘羿男　杨慧
(首都医科大学神经科学研究所, 北京　100054)
　　脑胶质瘤占颅内肿瘤的40%～ 50%。一般而言, 平均生
存期不超过 1 年。现有的**措施如外科手术切除、术后放
疗、化疗和****难以达到根除, 复发率很高, 严重影响生
存质量和生存期。90 年代由于肿瘤分子生物学理论与技术
DNA 合成, 从而杀伤被 tk 转染的肿瘤细胞及生产 tk 的细胞
系, 故特称为**基因疗法。我们完成了以下 3 方面的研究
内容: (1)含HSV 2tk 目的的基因的4 种质粒和逆转录载体的
构建, 包括pCMV 2tk、 pL 22tk、 PEL SN 2tk、 pN 2A 2tk, 经酶切鉴
的发展, 使得基因**成为医学研究领域的前沿课题, 为国
内外研究的热点。
恶性胶质瘤基因**的策略主要有以下6 类: 11基因置
换; 21 基因补偿; 31 基因失活; 41 **基因**; 51 耐药基
因**61**基因**。就脑胶质瘤而言, **基因是*佳
选择。本研究在上述报道的基础上, 使用单纯疱疹病毒胸苷
激酶(herpes simp lex virus thym idine k inases, HSV 2tk)为靶
基因。这是因为 tk 基因表达产物为一种酶, 此酶可使鸟苷类
似物(ganciclovir, GCV )磷酸化, 单磷酸化的GCV 在细胞内
转化为三磷酸化形式, 掺入分裂细胞的DNA 中, 抑制其
定证明是正向插入; 酶切后的 Southern 杂交显示均含有
HSV 12tk 序列。(2)将重组HSV 12tk 基因的逆转录病毒载体
(pN 2A 2 HSV 12tk)DNA 行体外包装, 病毒滴度达 5×105
cfuö
m l。 (3)通过体外细胞毒实验和体内人脑胶质瘤裸鼠模型的
实验性基因**, 结果表明实验组与对照组之间差异显著(P
< 0101)。现已完成了人脑胶质瘤的实验性基因**工作, 为
今后临床方案的实施提供了基础资料。
3 北京市自然科学基金资助课题(No. 7951003)
收稿1998212