地黄益知浸膏对老年性痴呆大鼠海马磷酸化creb、gsk-3β表达的影响

地黄益知浸膏对老年性痴呆大鼠海马磷酸化creb、gsk-3β表达的影响穿梭、穿梭实验、穿梭箱、shuttlebox、主动回避实验、active avoidancesystem

穿梭、穿梭实验、穿梭箱、shuttlebox、主动回避实验、active avoidancesystem

【摘要】 目的 观察地黄益知浸膏（dihuang yizhi jingao,dhyzjg）对老年性痴呆（ad）大鼠学习记忆能力及海马组织环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(cyclicamp response element-binding protein，creb)、pcrebser133、糖原合成酶激酶 (glycogen synthase kinase，gsk)-3β、pgsk-3βser9表达的影响，探索其防治ad的可能机制。方法 采用右侧海马注射β淀粉样肽（aβ）25～35制备ad大鼠模型，用穿梭箱及水迷宫检测其学习记忆能力；应用**印迹法测定其creb、gsk-3β的磷酸化水平。结果 dhyzjg可剂量依赖性地改善ad大鼠的学习、记忆能力;与ad组相比,dhyzjg高剂量组海马pcrebser133水平显著增高 (p＜0.01),pgsk-3βser9水平明显增高(p＜0.05)。结论 dhyzjg可明显改善ad大鼠认知功能障碍,其机制可能与其上调海马creb、gsk-3β蛋白的磷酸化水平有关。穿梭、穿梭实验、穿梭箱、shuttle box、主动回避实验、active avoidance system

【关键词】 地黄益知浸膏；老年性痴呆；环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(creb)；糖原合成酶激酶(gsk)-3β

穿梭、穿梭实验、穿梭箱、shuttle box、主动回避实验、active avoidance system

　　老年性痴呆(ad) 属于一种起病隐匿的进行性发展的痴呆，是痴呆中*常见的一种进展性脑变性**。淀粉样蛋白沉积、神经纤维缠结、神经元丢失是ad的主要病理改变。近年来发现，环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(cyclicamp response element-binding protein,creb) 是细胞内多种信号通路的一种关键成分，其蛋白磷酸化水平的变化可影响神经元突触可塑性和神经网络的形成〔1，2〕。糖原合成酶激酶(glycogen synthase kinase，gsk)-3β是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,其广泛存在于各种细胞中,参与多种信号转导通路调节,在tau蛋白磷酸化调节中起非常重要的作用 〔3〕。体外研究表明aβ可明显抑制培养的海马神经元中的长时程增强电位及pka/creb介导的信号转导途径，激活gsk-3β并以gsk-3β依赖的方式引起神经元丢失〔4，5〕。地黄益知浸膏（dihuang yizhi jingao，dhyzjg）是采用重庆名中医王辉武教授提供的验方所制,在临床**中具有改善和延缓ad认知衰退的作用。目前,dhyzjg对ad尤其是其信号转导通路的作用机制尚不清楚。本研究旨在以淀粉样蛋白级联假说为切入点,观察dhyzjg是否能调节ad大鼠行为学及海马creb、gsk-3β蛋白的磷酸化水平，探讨dhyzjg是否通过改善脑组织神经元存活信号途径的功能以及蛋白激酶／蛋白磷酸酯酶磷酸化系统失衡而发挥**ad的作用。穿梭、穿梭实验、穿梭箱、shuttle box、主动回避实验、active avoidance system

　　1 材料与方法穿梭、穿梭实验、穿梭箱、shuttle box、主动回避实验、active avoidance system

　　1.1 实验动物分组 wistar大鼠，雄性96只,体重(250±20)g,第三军医大学野战外科研究所实验动物中心提供，清洁级。经穿梭箱训练粗筛后,淘汰6只，随机均分为假手术组、模型组、dhyzjg低、中、高剂量组、多奈哌齐（donepezil）组,每组15只。dhyzjg由熟地黄、山茱萸、石菖蒲、远志、巴戟天等8味中药（重庆汉邦天然药业有限公司）组成,重庆中药研究所鉴定为纯正中药材,并由该研究所经水煮醇提法,制成中药流浸膏（1 g流浸膏相当于2g生药含量）。置0～4℃ 冰箱保存。在实验前对dhyzjg流浸膏进行毒理实验,ld50＞50g（生药）/kg。穿梭、穿梭实验、穿梭箱、shuttle box、主动回避实验、active avoidance system

　　1.2 方法穿梭、穿梭实验、穿梭箱、shuttle box、主动回避实验、active avoidance system

　　1.2.1  主要试剂与仪器  多奈哌齐由卫材(中国)药业有限公司提供;creb 抗体，pcrebser133抗体、pgsk-3βser9抗体均为cellsignaling公司产品；gsk-3β抗体购自北京博奥森试剂公司;aβ25～35为首都医科大学宣武医院多肽室提供；β-actin抗体均为santacruz公司产品；凝胶扫描成像系统(bio-rad公司，美国);电脑控制的穿梭箱系统（第三军医大学大坪医院野战外科研究所）、大鼠脑立体定位仪%