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参乌胶囊对拟亨廷顿病大鼠行为及脑内神经营养因子的影响
日期：2024-04-27 04:43
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摘要：
摘要:目的 观察拟亨廷顿病模型大鼠学习记忆改变情况 ,脑黑质、海马部位脑源性神经营养因子
(BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的改变情况及参乌胶囊对其的干预作用。方法 用
线粒体呼吸链复合体 Ⅱ/ Ⅲ抑制剂 ——— 3 - 硝基丙酸(32nitropropionic acid ,32NPA) 20 mg/ kg对 SD 大
鼠隔日腹腔注射连续造模20 d ,建立 HD大鼠模型。造模的同时 ,用药组大鼠给予参乌胶囊连续灌
胃25 d。阳性对照药组自造模当日起给予氟**醇。应用Morris水迷宫及避暗实验检测大鼠学习
记忆能力。应用**组织化学染色法检测大鼠海马 CA1及 CA4区BDNF、 GDNF的细胞数量及细胞
面积。结果 Morris水迷宫实验中 ,模型大鼠的游出时间及游出距离较对照组明显延长 ,参乌胶囊
用药组可以显著缩短大鼠的游出时间及距离。避暗实验中 ,参乌胶囊用药组大鼠较模型大鼠进入
暗箱的潜伏期分别显著性延长56169 s和54124 s。在海马CA1及CA4区 ,模型组动物BDNF、 GDNF
阳性细胞的表达明显较正常对照组细胞数减少 ,阳性细胞总面积减少。而 962 中剂量组对于此区
BDNF、 GDNF阳性细胞的表达明显具增强作用( P < 0101) 。结论 参乌胶囊可以明显增强动物学
习记忆能力 ,增强32NPA模型大鼠海马处BDNF及 GDNF的表达。
关键词:3 - 硝基丙酸;亨廷顿病;神经营养因子;大鼠
中图分类号:R285. 5
1 材料与方法
1. 1 材料
1.1. 1 动物:雄性 SD 大鼠 ,体重 230～260 g ,SPF
级 ,购自中国药品生物制品检定所动物繁育中心(京
动许字D017号) 。
1. 1. 2 试剂:3 - 硝基丙酸(3 - nitropropionic acid ,32
NPA)为 Sigma 公司产品。甲醛、异戊烷、 30 %过氧化
氢(H2O2) 、二甲苯、中性树胶均购自北京化学试剂公
司。BDNF、 GDNF抗体、二抗 Ra IgG/Mo IgG、三抗 S
- A/ HRP、封闭用羊血清、 DAB购自北京中山生物技
术有限公司。
1. 1. 3 **:参乌胶囊由人参、制首乌、石菖蒲等 6
味中药组成 ,由我室自行研制、委托北京第四制药厂
加工 ,批号 980515 ,每克干粉含生药 6125 g。实验
中 ,采用干粉剂量 ,溶于水 ,制成溶液应用。氟**
醇 ,北京市双桥制药厂生产 ,批号 950202 ,京卫药准
字(86)第106号。
1. 1. 4 仪器:Noesis Vision 公司 VISILOG5. 0 图象分
析系统 ,恒温冷冻切片机(英国山盾公司 ASE - 620
院**研究所。
1. 2 方法
1. 2. 1 分组及给药:雄性 SD 大鼠随机分组。正常
对照组 ,蒸馏水灌胃5 d后 ,隔日腹腔注射与模型组
等剂量的生理盐水; 模型组 ,32NPA 20 mg/ kg 腹腔
注射 ,隔日 1 次 ,共造模 20 d ;参乌胶囊小、中、大剂
量组分别给予参乌胶囊 0145 g/ kg、 019 g/ kg 和 118
g/ kg灌胃5 d后腹腔注射 32NPA 造模 ,再连续灌服
参乌胶囊20 d ;阳性对照药组:造模当天开始给予氟
**醇011μg/ kg体重 ,后隔日递增011μg/ kg体重 ,
直至1μg/ kg体重。
1. 2. 2 32NPA致神经退行性**大鼠模型的建立:
每100 mg 32NPA溶于1 mL 无水乙醇中 ,再用 019 %
无菌生理盐水稀释至 4 g/ L ,调节其 pH为 7. 4。模
型组动物隔天腹腔注射 32NPA 20 mg/ kg ,共造模 20
d。
1. 2. 3 大鼠 Morris 水迷宫实验:参照 Morris R[1 ]
及
洪岸[2 ]
,匡培梓[3 ]
等的方法进行实验。
大鼠每天训练2次 ,共训练4 d ,第1天训练时 ,
型) ,Morris水迷宫箱、避暗箱均购自中国医学科学所选入池位置为站台所对及相邻象限 ,将大鼠于象
(BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的改变情况及参乌胶囊对其的干预作用。方法 用
线粒体呼吸链复合体 Ⅱ/ Ⅲ抑制剂 ——— 3 - 硝基丙酸(32nitropropionic acid ,32NPA) 20 mg/ kg对 SD 大
鼠隔日腹腔注射连续造模20 d ,建立 HD大鼠模型。造模的同时 ,用药组大鼠给予参乌胶囊连续灌
胃25 d。阳性对照药组自造模当日起给予氟**醇。应用Morris水迷宫及避暗实验检测大鼠学习
记忆能力。应用**组织化学染色法检测大鼠海马 CA1及 CA4区BDNF、 GDNF的细胞数量及细胞
面积。结果 Morris水迷宫实验中 ,模型大鼠的游出时间及游出距离较对照组明显延长 ,参乌胶囊
用药组可以显著缩短大鼠的游出时间及距离。避暗实验中 ,参乌胶囊用药组大鼠较模型大鼠进入
暗箱的潜伏期分别显著性延长56169 s和54124 s。在海马CA1及CA4区 ,模型组动物BDNF、 GDNF
阳性细胞的表达明显较正常对照组细胞数减少 ,阳性细胞总面积减少。而 962 中剂量组对于此区
BDNF、 GDNF阳性细胞的表达明显具增强作用( P < 0101) 。结论 参乌胶囊可以明显增强动物学
习记忆能力 ,增强32NPA模型大鼠海马处BDNF及 GDNF的表达。
关键词:3 - 硝基丙酸;亨廷顿病;神经营养因子;大鼠
中图分类号:R285. 5
1 材料与方法
1. 1 材料
1.1. 1 动物:雄性 SD 大鼠 ,体重 230～260 g ,SPF
级 ,购自中国药品生物制品检定所动物繁育中心(京
动许字D017号) 。
1. 1. 2 试剂:3 - 硝基丙酸(3 - nitropropionic acid ,32
NPA)为 Sigma 公司产品。甲醛、异戊烷、 30 %过氧化
氢(H2O2) 、二甲苯、中性树胶均购自北京化学试剂公
司。BDNF、 GDNF抗体、二抗 Ra IgG/Mo IgG、三抗 S
- A/ HRP、封闭用羊血清、 DAB购自北京中山生物技
术有限公司。
1. 1. 3 **:参乌胶囊由人参、制首乌、石菖蒲等 6
味中药组成 ,由我室自行研制、委托北京第四制药厂
加工 ,批号 980515 ,每克干粉含生药 6125 g。实验
中 ,采用干粉剂量 ,溶于水 ,制成溶液应用。氟**
醇 ,北京市双桥制药厂生产 ,批号 950202 ,京卫药准
字(86)第106号。
1. 1. 4 仪器:Noesis Vision 公司 VISILOG5. 0 图象分
析系统 ,恒温冷冻切片机(英国山盾公司 ASE - 620
院**研究所。
1. 2 方法
1. 2. 1 分组及给药:雄性 SD 大鼠随机分组。正常
对照组 ,蒸馏水灌胃5 d后 ,隔日腹腔注射与模型组
等剂量的生理盐水; 模型组 ,32NPA 20 mg/ kg 腹腔
注射 ,隔日 1 次 ,共造模 20 d ;参乌胶囊小、中、大剂
量组分别给予参乌胶囊 0145 g/ kg、 019 g/ kg 和 118
g/ kg灌胃5 d后腹腔注射 32NPA 造模 ,再连续灌服
参乌胶囊20 d ;阳性对照药组:造模当天开始给予氟
**醇011μg/ kg体重 ,后隔日递增011μg/ kg体重 ,
直至1μg/ kg体重。
1. 2. 2 32NPA致神经退行性**大鼠模型的建立:
每100 mg 32NPA溶于1 mL 无水乙醇中 ,再用 019 %
无菌生理盐水稀释至 4 g/ L ,调节其 pH为 7. 4。模
型组动物隔天腹腔注射 32NPA 20 mg/ kg ,共造模 20
d。
1. 2. 3 大鼠 Morris 水迷宫实验:参照 Morris R[1 ]
及
洪岸[2 ]
,匡培梓[3 ]
等的方法进行实验。
大鼠每天训练2次 ,共训练4 d ,第1天训练时 ,
型) ,Morris水迷宫箱、避暗箱均购自中国医学科学所选入池位置为站台所对及相邻象限 ,将大鼠于象
